Химическая и биологическая безопасность

Различение живых и погибших клеток – основная проблема во многих аспектах биологических исследований. Существующие технологии определения живых и погибших клеток не позволяют проводить количественную дифференциацию каких-либо конкретных клеток в смешанных популяциях, что сильно затрудняет процесс исследования или анализа. Авторы решили эту проблему путем разработки новой концепции окрашивания живого/неживого материала этидиум-моноазидом (EMA) в комбинации с ПЦР в масштабе реального времени (EMA-PCR). При анализе проб с живыми/погибшими клетками совмещенным методом EMA-PCR был получен динамический диапазон, равный примерно 4 lg. Дифференциация живых/погибших клеток достигалась в результате ковалентного связывания ЕМА и ДНК погибших клеток путем фотоактивации. EMA проникал только в погибшие клетки с нарушенной системой мембрана–клеточная стенка. Опыты по оценке эффективности метода проводились с крупной присутствующей в пищевых продуктах бактерией Campylobacter jejuni. Обычная диагностика этой бактерии очень затруднена из-за специфических требований ее роста и возможности пребывания ее в живом, но не способном культивироваться состоянии. Условия анализа включали обнаружение в смешанных и естественных пробах, выживаемость в пище и выживаемость после дезинфекции или обработки антибиотиками. При всех условиях испытаний достигалось надежное различение живых и погибших клеток. Сравнение со стандартными методами на основе флуоресценции показало, что EMA-PCR имеет более широкий динамический диапазон и обеспечивает количественное определение в смешанных и комплексных пробах. В заключение можно отметить, что EMA-PCR представляет собой новый метод ПЦР для количественного различения живых и погибших клеток в масштабе реального времени в самых разных областях применения. Matforsk, Norwegian Institut for Food Research, Ås, Norway.

При спонсорской поддержке Европейского центра валидации альтернативных методов (ECVAM) проводили валидационное исследование пригодности теста культивирования целых постимплантационных эмбрионов крыс для прогноза эмбриотоксического действия (ЭД) химических веществ in vivo. В исследовании участвовали 4 лаборатории. Тестировали 20 закодированных веществ, которые по своим эффектам in vivo были разделены на 3 группы: не обладающие ЭД, обладающие слабым ЭД, обладающие выраженным ЭД. Выявили хорошую воспроизводимость результатов, а также хорошую прогнозирующую способность теста в отношении эмбриотоксического потенциала химических веществ. Точность прогноза достигала 100% для веществ с выраженным ЭД, 76% – для веществ со слабым ЭД, 70% – для веществ, не обладающих ЭД. Нидерланды, Nat. Inst. of Public Health and the Environment (RIVM), Bilthoven. Библ. 21.