Химическая и биологическая безопасность

В исследовании была расшифрована полная нуклеотидная последовательность большого полимеразного протеина (L) вакцинного вируса ЧМЖ (ЧМЖВ Сунгри/96), принадлежащего к азиатской линии дифференцировки. Ген ЧМЖВ Сунгри/96 имел от начала до конца длину из 6643 нуклеотидов и кодировал полипептид из 2183 аминокислот. ЧМЖВ Сунгри/96 имеет нуклеотидную гомологию в 94,1% с ЧМЖВ Нигерия 75/1 и гомологию в 64,7% с вирусом чумы собак. На уровне аминокислот ЧМЖВ Сунгри/96 имел аминокислотную идентичность в 96,2% с ЧМЖВ Нигерия 75/1 и 70,4–74,8% – с другими морбилливирусами. В ЧМЖВ Сунгри/96 присутствовали все установленные в L-протеине домены, характерные для парамиксовирусов. Филогенетический анализ различных L-протеинов морбилливирусов показал хорошо различимые кластеры, которые наблюдались в прежних исследованиях. Очень большое сходство с другими морбилливирусами наблюдалось в 3‘трейлерной последовательности длиной 37 нуклеотидов ЧМЖВ Сунгри/96. Таким образом, были получены новые данные о ЧМЖВ. Впервые была описана полимеразная генная последовательность ЧМЖВ индийского изолята. Индия, Central Inst. of Fisheries Technology, Cochin.

Действие токсина сибирской язвы начинается после того, как часть защитного антигена (PA83, 83 кД) связывается с поверхностным рецептором клетки млекопитающих и расщепляется протеазой из семейства фурина на 2 фрагмента – PA20 (20 кД) и PA63 (63 кД). После диссоциации PA20, связанный с рецептором PA63, спонтанно олигомеризуется до гептамера, способного связывать два ферментных компонента токсина и транспортирует их в цитозоль. При трипсинолизе PA83 образуются PA63 и PA20, лишенные бесструктурных областей у N- и C-концов. Эти фрагменты метили красителями, составляющими пару для резонансного переноса энергии, что позволило количественно следить за их ассоциацией в растворе. Кинетически определено, что такой комплекс имеет Kd 190 нМ при константе скорости диссоциации 3,3´10^–2 с^–1 (t_1/2 21 с). Методом остановленного потока наблюдали двустадийный характер ассоциации. За быстрой бимолекулярной стадией (k=1,4´10⁵ M^–1 c^–1) следует медленная стадия (k=3,5´10^–3) с константой равновесия изомеризации 2,1. Двустадийный механизм соответствует и диссоциации комплекса с последующей изомеризацией PA63. Это означает, что после расщепления PA83 на поверхности клетки PA20 диссоциирует в течение 1 мин. Затем изомеризация PA63 возможно приводит к олигомеризации и последующим стадиям действия токсина. Запросы по адресу: jcollier@hms.harvard.edu. Библ. 27.